[1]尹全,李忆,宋君,等.多重PCＲ 检测抗草甘膦大豆GTS40-3-2[J].大豆科学,2016,35(04):666-671.[doi:10.11861/j.issn.1000-9841.2016.04.0666]
　YIN Quan,LI Yi,SONG Jun,et al.Multiplex PCＲ for Detection of Ｒoundup-Ｒeady Soybean GTS40-3-2[J].Soybean Science,2016,35(04):666-671.[doi:10.11861/j.issn.1000-9841.2016.04.0666]
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多重PCＲ 检测抗草甘膦大豆GTS40-3-2

《大豆科学》[ISSN:1000-9841/CN:23-1227/S] 卷: 第35卷 期数: 2016年04期 页码: 666-671 栏目: 出版日期: 2016-07-20
Title:
Multiplex PCＲ for Detection of Ｒoundup-Ｒeady Soybean GTS40-3-2
作者:
尹全1; 李忆2; 宋君1; 王东1; 张富丽1; 刘文娟1; 常丽娟1; 刘勇3
1. 四川省农业科学院分析测试中心，四川成都610066; 2. 四川民族学院，四川康定626001; 3. 四川省农业科学院植物保护研究所，四川成都610066
Author(s):
YIN Quan1; LI Yi2; SONG Jun1; WANG Dong1; ZHANG Fu-li1; LIU Wen-juan1; CHANG Li-juan1; LIU Yong3
?1． Center of Analysis and Testing，Sichuan Academy of Agricultural Sciences，Chengdu 610066，China; 2． Sichuan Minzu College，Kangding 626001，China; 3． Institute of Plant Protection，Sichuan Academy of Agricultural Sciences，Chengdu 610066，China
关键词:
多重PCＲ;  大豆;  GTS40-3-2;  检测
Keywords:
Multiplex PCＲ;  Soybean;  GTS40-3-2;  Detection
分类号:
S565. 1
DOI:
10.11861/j.issn.1000-9841.2016.04.0666
文献标志码:
A
摘要:
将大豆内源参照基因( Lectin) 、外源基因P-CaMV 35S、CP4-EPSPS 和T-NOS 作为多重PCＲ 检测参数，建立了一种多重PCＲ 检测抗草甘膦大豆GTS40-3-2 的方法。反应条件优化结果表明: 多重PCＲ 的适宜退火温度为58℃，适宜引物终浓度( μmol·L － 1 ) 配比为: 0. 1∶0. 2∶0. 2∶ 0. 2。采用已知样品对多重PCＲ 体系进行验证，检测结果可靠，证明该多重PCＲ 体系为一种有效的抗草甘膦大豆GTS40-3-2 的检测方法。
Abstract:
In order to establish a multiplex PCＲ ( polymerase chain reaction) method detection for Ｒoundup-Ｒeady soybeanGTS40-3-2，the soybean endogenous reference gene ( Lectin) ，exogenous gene CaMV 35S promoter，CP4-EPSPS and NOSterminator were used as detection parameters. The optimization results showed that the optimum annealing temperature of multiplePCＲ was 58℃，and the optimum final concentration of primers( μmol·L － 1 ) ratio is 0. 1∶ 0. 2∶ 0. 2∶ 0. 2. The multiplexPCＲ method is confirmed to be reliable through known samples. And it is proved that the multiplex PCＲ system is an effectivemethod for detection Ｒoundup-Ｒeady soybean GTS40-3-2.

参考文献/References:

1］ 张海波. 适合转基因大豆GTS40-3-2 复合PCＲ 检测标准分子研制及番茄内标准基因国际协同验证［D］. 上海: 上海交通大学，2008: 25. ( Zhang H B. A novel plasmid molecule for duplexquantitative PCＲ analysis of roundup ready soybean and internationalvalidation of tomato endogenous reference gene ［D］.Shanghai: Shanghai Jiaotong University，2008: 25. )

［2］ 李信申，何红，胡汉桥，等. 抗草甘磷转基因大豆多重PCＲ检测及假阳性问题探讨［J］. 广东海洋大学学报，2008，28( 6) : 66-71. ( Li X S，He H，Hu H Q. Multiplex PCＲ detectionof transgenetic soybean resistant to glyphosate and discussion offalse positive results［J］. Journal of Guangdong Ocean University，2008，28( 6) : 66-71. )
［3］ 中华人民共和国农业部农业转基因生物安全管理办公室.2004-2011 年进口用作加工原料的农业转基因生物审批情况［EB/OL］. ( 2012-02-03) . ［2015-06-18］. http: / /www. moa.gov. cn /ztzl /zjyqwgz /spxx /201202 /P020130618408715248212.pdf. ( The agricultural genetically modified organisms safety managementoffice of MOA. The approval of imported agriculture GMOused as processing raw materials from 2004 to 2012 in china ［EB/OL］. ( 2012-02-03) . ［2015-06-18］. http: / /www. moa. gov. cn /ztzl /zjyqwgz /spxx /201202 /P020130618408715248212. pdf. )
［4］ 芦春斌，周文，刘标. 喂食转基因大豆对子代雄鼠生殖系统的影响［J］. 大豆科学，2013，32 ( 1 ) : 119-123. ( Lu C B，Zhang W，Liu B，et al. Effects of transgenic soybean on reproductivesystem in male mice ［J］. Soybean Science，2012，31( 2) :292-294. )
［5］ Domingo J L. Health risks of GM foods: Many opinions but fewdata ［J］. Science，2000，288( 5472) : 1748-1749.
［6］ 金芜军，贾士荣，彭于发. 不同国家和地区转基因产品标识管理政策的比较［J］. 农业生物技术学报，2004，2( 1) : 1-7.( Jin W J，Jia S Ｒ，Peng Y F，et al. Comparison of labeling policyof genetically modified products in different countries and territories［J］. Journal of Agricultural Biotechnology，2004，12( 1) : 1-7. )
［7］ 中华人民共和国农业部. 农业转基因生物标识管理办法［EB/OL］. ( 2001-12-19) . ［2015-06-18］. http: / /www. gov. cn /gongbao/content /2002 /content_61835. htm. ( Ministry of Agricultureof the People’s Ｒepublic China. Identification measures for theadministration of agricultural genetically modified organisms ［EB/OL］. ( 2001-12-19 ) . ［2015-06-18］. http: / /www. gov. cn /gongbao /content /2002 /content_61835. htm. )
［8］ 黄昆仑，罗云波. 用巢式和半巢式PCＲ 检测转基因大豆Ｒoundup Ｒeady 及其深加工食品［J］. 农业生物技术学报，2003，11( 5) : 461-466. ( Huang K L，Luo Y B. Detecting genet4期尹全等: 多重PCＲ 检测抗草甘膦大豆GTS40-3-2 671ically modified soybean roundup ready ingredient in foodstuffs bynested PCＲ and semi-nested PCＲ［J］. Journal of Agricultural Biotechnology，2003，11( 5) : 461-466. )
［9］ 尹全，宋君，刘勇. 生物技术作物食品检测技术研究进展［J］. 江西农业学报，2010，22( 5) : 135-137. ( Yin Q，Song J，Liu Y. Ｒesearch progress in detection techniques for food from biotechcrops ［J］. Acta Agriculturae Jiangxi，2010，22( 5) : 135-137. )
［10］ 张富丽，雷绍荣，刘勇. 转基因作物及加工品检测技术概述［J］. 生物技术通讯，2009，20( 5) : 733-737. ( Zhang F L，LeiS Ｒ，Liu Y. Detection methods for transgenic trops and its processedgoods ［J］. Letters in Biotechnology，2009，20( 5) : 733-737. )
［11］ 徐景升，余爱丽，姚伟，等. 利用MPCＲ 技术快速检测进口大豆转基因背景［J］. 江西农业大学学报，2005，27 ( 2) : 262-264，269. ( Xu J S，Yu A L，Yao W，et al. Ｒapid Detection ofimported genetically modified soybean ( Glycine max) with MPCＲ［J］. Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis，2005，27( 2) :262-264，269. )
［12］ 何玮玲，张驰，杨静，等. 食品中4 种肉类成分多重PCＲ 的快速鉴别方法［J］. 中国农业科学，2012，45( 9) : 1873-1880.( He W L，Zhang C，Yang J，et al. A quick multiplex PCＲ methodfor the identification of four meat ingredients in food products［J］. Scientia Agricultura Sinica，2012，45( 9) : 1873-1880. )
［13］ 范宏英，吴清平，吴若菁，等. 饮用水中5 种致病菌多重PCＲ技术检测研究［J］. 微生物学通报，2005，32 ( 3) : 102-107.( Fan H Y，Wu Q P，Wu Ｒ J，et al. Study on detection of fivekindsof pathogenic bacteria in drinking water by multiplex PCＲ［J］. Microbiology，2005，32( 3) : 102-107. )
［14］ Chamberlain J S，Gibbs Ｒ A，Ｒainer J L，et al. Detection screeningof the duchenne muscular dystrophy locus via multiplex DNAimplication ［J］. Nucleic Acids Ｒesearch，1988，16: 1141-1156.
［15］ Fore V T，Pinto A D，Martino C，et al. A general multiplex PCＲassay for the general detection of genetically modified soya andmaize ［J］. Food Control，2005，l6( 6) : 535-539.
［16］ Germini A，Zanetti A，Salati C，et al. Development of a seventarget multiplex PCＲ for the simultaneous detection of transgenicsoybean and in feeds and foods ［J］. Journal of Agricultural andFood Chemistry，2004，52 ( 11) : 3275-3280.
［17］ GMO detection method database ( GMDD) ［EB/OL］. ［2015-06-18］. http: / /gmdd. shgmo. org /event /view/88.
［18］ 中华人民共和国农业部. NY/T 675-2003: 转基因植物及其产品检测大豆定性PCP 方法［S］. 北京: 中国标准出版社，2003.( Ministry of Agriculture of the People’s Ｒepublic China. NY/T675-2003: Detection of genetically modified plant organisms andderived products-Qualitative PCＲ methods for soybeans ［S］. Bei-Jing: China standard publishing house，2003. )［19］ 中华人民共和国农业部. 农业部1782 号公告-3-2012: 转基因植物及其产品成分检测调控元件CaMV 35S 启动子、FMV 35S启动子、NOS 启动子、NOS 终止子和CaMV 35S 终止子定性PCＲ 方法［S］. 北京: 中国标准出版社，2012. ( The agriculturedepartment announcement no. 1782-3-2012. Detection of geneticallymodified plants and derived products-Qualitative PCＲ methodsfor the regulatory elements CaMV 35S promoter，FMV 35Spromoter，NOS promoter，NOS terminator and CaMV 35S terminator［S］. BeiJing: China standard publishing house，2012. )
［20］ 中国国家标准化管理委员会. GB/T 19495. 6-2004: 转基因产品检测基因芯片检测方法［S］. 北京: 中国标准出版社，2004. ( Standardization Administration of the People’s Ｒepublic ofChina. GB/T 19495. 6-2004: Detection of genetically modified organismsand derived products gene chip detection ［S］. Beijing:China Standard Publishing House，2004. )
［21］ 赵红庆，苑锡铜，黄留玉. 多重PCＲ 技术在病原检测中的应用［J］. 生物技术通讯，2007，8 ( 5) : 863-866. ( Zhao H Q，Yuan X T，Huang L Y. Application of multiplex PCＲ in detectionof pathogens ［J］. Letters in Biotechnology，2007，8 ( 5 ) : 863-866. )
［22］ Henegariu O，Heerema N A，Dlouhy S Ｒ，et al. Multiplex PCＲ:Critical parameters and step-by-step protocol［J］. Biotechniques，1997，23 ( 3) : 504-511.

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[1]陶 然,郭顺堂.应用MPCR-DHPLC技术检测转基因大豆及其食品[J].大豆科学,2012,31(06):976.[doi:10.3969/j.issn.1000-9841.2012.06.025]
　TAO Ran,GUO Shun-tang.Detection of Transgenic Soybean and Its Food by MPCR-DHPLC Method[J].Soybean Science,2012,31(04):976.[doi:10.3969/j.issn.1000-9841.2012.06.025]
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备注/Memo

基金项目: 四川省财政现代农业技术创新与示范专项( 2014CXSF-040) ; 四川省教育厅自然科学一般项目( 15ZB0331) 。第一作者简介: 尹全( 1981-) ，男，硕士，助理研究员，主要从事转基因植物环境安全工作。E-mail: xiangfeng_1981@163． com。通讯作者: 刘勇( 1964-) ，男，研究员，主要从事转基因植物环境安全研究工作。E-mail: liuyongdr@163． com。

更新日期/Last Update: 2016-08-23